بروتوكول تحضير المستخلصات
جودة المستخلص تحدد كل نتيجة بعده. أي خطأ في التجفيف أو الحرارة يُفقد المركبات الفينولية فعاليتها، فتخرج النتائج ضعيفة دون سبب واضح. اتبع الخطوات بالترتيب.
قشور الرمان
Punica granatum
- 1
غسل القشور
تُغسل قشور الرمان جيداً بالماء المقطر لإزالة الأتربة وبقايا اللب، ثم تُصفّى من الماء الزائد.
- 2
التجفيف في الظل — 7 أيام
تُنشر القشور في مكان مظلّل وجيد التهوية لمدة سبعة أيام. التجفيف بالشمس المباشرة يهدم المركبات الفينولية الحساسة للحرارة والأشعة فوق البنفسجية.
لا تستخدم الشمس المباشرة أو الفرن — المواد الفعالة تتبخر وتتأكسد. - 3
الطحن إلى مسحوق ناعم
تُطحن القشور الجافة في مطحنة كهربائية حتى الحصول على مسحوق ناعم متجانس، ثم يُحفظ في وعاء محكم الإغلاق بعيداً عن الرطوبة.
- 4
الاستخلاص الكحولي — 50 غم + 500 مل إيثانول 70%
يُوزن 50 غراماً من المسحوق ويُضاف إلى 500 مل من الإيثانول بتركيز 70%. يُرجّ الخليط على الهزّاز (Shaker) لمدة 48 ساعة في درجة حرارة الغرفة وبعيداً عن الضوء.
الإيثانول 70% هو الأقوى: الماء يفتح الخلايا والكحول يستخلص الفينولات والفلافونويدات. - 5
الترشيح
يُرشّح المستخلص عبر ورق ترشيح (Whatman No.1) لإزالة الأجزاء الصلبة، ويُكرّر الترشيح للحصول على راشح صافٍ.
- 6
التبخير والتركيز
يُبخّر المذيب باستخدام المبخّر الدوّار (Rotary Evaporator) أو على حمام مائي عند 40 درجة مئوية فقط، للحصول على مستخلص مركّز.
لا تتجاوز 40°م — الحرارة العالية تُفقد المستخلص نشاطه المضاد للبكتيريا.
القرنفل
Syzygium aromaticum
- 1
تنظيف البراعم
تُنقّى براعم القرنفل من الشوائب والأعواد، وتُغسل سريعاً بالماء المقطر ثم تُجفّف بمنشفة ورقية.
- 2
التجفيف والطحن
تُجفّف البراعم في الظل حتى تصبح هشّة، ثم تُطحن إلى مسحوق ناعم. القرنفل غني بالأوجينول وهو مركب متطاير، لذا يُطحن على دفعات صغيرة.
اطحن الكمية التي تحتاجها فقط — الأوجينول يتطاير مع التخزين الطويل. - 3
الاستخلاص الكحولي
يُضاف 50 غراماً من مسحوق القرنفل إلى 500 مل إيثانول 70%، ويُترك 48 ساعة على الهزّاز مع رجّ دوري.
- 4
الترشيح والتركيز
يُرشّح المستخلص بورق ترشيح ثم يُبخّر المذيب على 40°م للحصول على مستخلص قرنفل مركّز ذي رائحة نفّاذة مميزة.
قائمة تحقق قبل بدء التجربة
- قشور مجففة في الظل 7 أيام كاملة
- مسحوق ناعم متجانس بلا كتل
- إيثانول 70% طازج ومُقاس بالمخبار
- هزّاز مضبوط على سرعة معتدلة
- ورق ترشيح Whatman No.1
- حمام مائي مضبوط على 40°م